姓名: 邹璟

医院（或学校）: 福建医科大学

论文类别: 血液保护

科室: 省立临床医学院

论文摘要: 背景 蛋白C（Protein C，PC）是由肝脏合成的维生素K依赖性血浆糖蛋白，循环中以无活性的酶原形式存在。在凝血酶-血栓调节蛋白复合物的作用下，酶原形式的PC被转化为活化蛋白C（Activated Protein C，APC），后者是天然抗凝系统的核心成分。APC通过灭活凝血因子Va和VIIIa等途径发挥抗凝作用，并在维持血液流变学平衡中具有关键调节功能。遗传性蛋白C缺乏症（protein C deficiency，PCD）是一种常染色体显性遗传的血栓倾向性疾病，以反复发生静脉血栓栓塞症（venous thromboembolism，VTE）为主要临床特征。其发病机制主要归因于编码蛋白C的PROC基因功能缺陷。本研究聚焦于一个遗传性PCD家系，该家系的先证者表现出少见而严重的临床表型，包括缺血性肠病、肾梗死以及反复发作的动脉和静脉血栓。我们针对该家系开展了致病基因筛查与功能学鉴定研究。 方法 收集该易栓症家系成员的临床资料，对先证者外周血样本进行凝血功能检测，采用凝固法测定Protein S（PS）活性，发色底物法测定Protein C（PC）活性。通过Comprehensive second‑generation sequencing先证者筛查可疑责任突变，并进行Sanger测序验证家系成员基因突变，构建野生型与突变型PROC真核表达质粒并转染至HEK293T细胞。采用qRT-PCR、Western Blot及免疫荧光技术检测PROC mRNA稳定性、蛋白表达与亚细胞定位；并检测AKT/p-AKT信号通路的蛋白表达及磷酸化状态。利用Swiss-Model同源建模和NetPhos-3.1算法预测突变对PC三维结构及潜在磷酸化位点的影响。 结果 该家系中共发现两名患病成员。先证者为一名中年男性，临床上反复发生严重的动静脉血栓事件，包括肠系膜血管血栓所致的肠道缺血、肾动脉血栓形成以及深静脉血栓等，并检测到外周血PC活性显著降低。先证者的女儿年纪尚轻，已出现双下肢深静脉血栓形成，伴PC活性降低。通过基因检测，在父女二人中均鉴定出PROC的exon 7的一个致病性的杂合错义突变：c.658C>T(p.Arg220Trp)，呈遗传共分离。体外细胞实验中c.658C>T突变导致PROC mRNA表达量及蛋白分泌量升高，但PC活性显著降低。突变组AKT总蛋白表达未见明显变化（p=0.304），而磷酸化p-AKT（Ser473）水平较野生型下降（p＜0.0001），提示AKT信号通路磷酸化受抑。生信分析表明，p.Arg220Trp突变导致局部疏水性增强，破坏Ser223与激酶催化中心的电荷互补，显著降低其磷酸化概率。这一结构改变与功能分析相一致，支持该突变会影响蛋白C的正常抗凝功能及相关的细胞信号途径。 结论 PROC c.658C>T（p.Arg220Trp）突变通过损害PC抗凝活性、干扰PC/PS复合体稳定性及抑制AKT磷酸化，进一步导致PCD表型及血栓易感性。